Servicios Científico-Técnico

Servicio de Citometría

1. Definición del servicio

 

La citometría de flujo es una técnica potente para el análisis de múltiples parámetros de células individuales dentro de poblaciones heterogéneas. Los citómetros de flujo realizan este análisis pasando miles de células por segundo a través de un haz de láser y capturando la luz que emerge de cada célula a su paso. Los datos recopilados pueden analizarse estadísticamente mediante software de citometría de flujo para reportar características celulares como:

  • Tamaño celular (FSC)
  • Complejidad celular (SSC)
  • Fluorescencia

Los citómetros de flujo tienen la capacidad de medir múltiples parámetros y marcadores celulares de un gran número de células a una velocidad rápida. Por lo tanto, las aplicaciones de la citometría de flujo son numerosas, lo que ha llevado al uso generalizado de estos instrumentos en la investigación biológica. Las principales aplicaciones que hemos desarrollado en el centro son:

  • Ensayos de viabilidad celular
  • Potencial de membrana
  • Inmunofenotipado
  • Análisis del ciclo celular
  • Apoptosis y necrosis
  • Separación celular
    • Células madre (ratón)
    • Líneas celulares
    • Células de los discos de Drosophila (ojos y alas)
    • Células hematopoyéticas (sangre, riñón, hígado, médula ósea, bazo y timo de ratón)

 

2. Servicios ofrecidos

 

  • Asistencia a los investigadores en el diseño de experimentos.
  • Capacitación de usuarios de citómetros analíticos
  • Asistencia a los investigadores con el análisis y la interpretación de datos.
  • Separación de poblaciones celulares

3. Personal y contacto

 

  • Mª José Sánchez Sanz- Coordinadora Científica.
  • Corín Díaz Ramos-responsable técnico. CSIC. 954977432
  • Macarena López Mayorga-Técnico.

 

4. Equipamiento

 

Sony MA900 Cell Sorter

  • Cuatro láseres en dos ejes: 488/561nm y 405/638nm
  • 14 parámetros: FSC, BSC y 12 colores de fluorescencia
  • Tipos de tubos de adquisición de muestras: 0,5 ml, 1,5 ml, 5 ml y 15 ml
  • Tasas de adquisición de hasta 70 000 eventos por segundo
  • Control de temperatura de muestras y tubos de recolección: 5ºC y 37ºC
  • Separación celular en tubos, epp o placas de 6, 12, 24, 48, 96 y 384 pocillos
  • Software Index
  • Nozzles: 70 y 100 micras
  • Software: Sony-MA

La configuración óptica disponible se detalla a continuación:

Láser Filtros òpticos LPF Filtros BP Fluorocromos
405nm FL6 450/50 Dapi, Bviolet 421
FL7/LP10 487.5LP 525/50 BViolet510,Pacific Orange
FL8/LP4 561LP 585/30 BViolet570
FL9/LP3 600LP 617/30 BViolet 605
FL10/LP7 639LP 665/30 BViolet 650
FL11/LP6 685LP 720/60 BViolet 711
FL12/LP5 752LP 785/60 BViolet 785
488nm FL1 525/50 Fitc, AlexaFluor 488,EGFP,EYFP
FL2/LP4 561LP 585/30 PE
FL3/LP3 600LP 617/30 PE-Texas Red, PI,
FL4/LP7 639LP 695/50 7AAD, PE-cy5, PerCP
FL5/LP1 752LP 785/60 PE-CY7
BSC 488/17B
561nm FL2/LP4 561LP 585/30 mOrange, DsREd-Monomer, tdTomato
FL3/LP3 600LP 617/30 mCherry, Alexa Fluor 594
FL4/LP7 639LP 695/50 mPlum
638nm FL10/LP7 639LP 665/30 APC, Cy5, Alexa Fluor 647
FL11/LP6 685LP 720/60 APC-Cy5.5, Alexa Fluor 700
FL12/LP5 752LP 785/60 APC-Cy7, APC-Alexa Fluor 750

 

BD FACSAria Cell Sorter

  • Dos láseres: 488 nm y 633 nm
  • 9 parámetros: FSC, SSC y 7 colores de fluorescencia
  • Adquisición de muestras con control de temperatura
  • Tasas de adquisición de hasta 70 000 eventos por segundo
  • Separación celular de hasta cuatro poblaciones simultáneamente
  • Clasificación de células en tubo o placa de cultivo
  • Nozzles 85 y 100 micras
  • Software: FACSDiva

La configuración óptica disponible se detalla a continuación:

Láser PMT LPF Filtros BP Fluorocromos
488 nm A 735 780/60 PE-Cy7
B 655 695/40 PerCP-Cy5.5 ó PI
675/20 PerCP ó PE-Cy5
C 595 610/20 PE-Texas Red
D 556 576/26 PE ó PI
585/42 PE/PI
E 502 530/30 FITC
F 488/10 SSC
 633 nm A 735 780/60 APC-Cy7
B 685 712/21 APC-Cy5.5
C 660/20 660/20 APC

5. Tarifas

 

Servicios ofertados
 TARIFA
UPO Universidades y OPIs Empresas/Otros
FacsAria análisis 7,60 €/h. 23,00 €/h. 30,50 €/h.
FacsAria separación celular 10,15 €/h. 30,50 €/h. 40,60 €/h.
Sony MA900 análisis 7,60 €/h. 23,00 €/h. 30,50 €/h.
Sony MA900 separación celular 10,15 €/h. 30,50 €/h. 40,60 €/h.

 

 

6. Publicaciones y Recursos web

Recursos web

1. Invitrogen: Fluorescence Tutorials
www.invitrogen.com/site/us/en/home/support/Tutorials.html

 

2. BD Biosciences: Spectrum Viewer
https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/bd-spectrum-viewer

3. Purdue University Cytometry Laboratories
www.cyto.purdue.edu/

4. Iberian Cytometry Society
www.citometria.org/

5. Compensation tutorial
http://drmr.com/

6. Herramienta web para análisis de datos de citometría. (Para dudas se puede consultar en: https://umgcccfcsr.github.io/CytometryInR/course/00_Floreada/ o preguntar a Macarena López.)

 

https://floreada.io/


Flow basics 2.1 https://www.youtube.com/watch?v=gC4brjHbLkk. Conceptos básicos sobre preparación de la muestra

 

Flow basics 2.2 https://www.youtube.com/watch?v=SXyeDKZecZA. Preparación de la muestra en más profundidad: digestión de la muestra: método de digestión, elección de enzima de digestión, titulación de anticuerpos, cantidad de células y cálculo del índice de tinción.

 

El resto de vídeos están más relacionados con la realización de la citometría:
Flow basics 2.3:https://www.youtube.com/watch?v=WHtqy3X_ch8
Flow basics 2.4:https://www.youtube.com/watch?v=b0MVzjeTzbk
Flow basics 2.5:https://www.youtube.com/watch?v=wTUviuik6rw

 

Publicaciones

  1. Flow cytometry and cell sorting (1992) A. Radbruch
    Springer-Verlag, Berlin.
    (579 FLO)
  2. In living color: protocols in flow cytometry Rochelle A. Diamond, Susan DeMaggio
    (579 IN)
  3. Flow Cytometry. A Practical Approach (2000) Ormerod, MG.
    3rd edition. Oxford University Press, Oxford. Robinson, J.P.,
    (576 FLO)
  4. Practical Flow Cytometry (2003) Howard Shapiro.Fourth Edition  Wiley-Liss, New York
    (576 SHA)
  5. Cytometry: new developments (2004)
    San Diego: Elsevier
    (576 CYT)
  6. Flow cytometry protocols (2004)
    Totowa, New Jersey, Humana Press, cop.
    (576 HAW flo)
  7. Flow cytometry: principles and applications (2007)
    Totowa, New Jersey, Humana Press, cop.
    (576 FLO)