Servicio de Cultivos Celulares

1. Definición de servicio

 

El Servicio de Cultivos Celulares del CABD proporciona apoyo técnico y científico a los grupos de investigación en el desarrollo de procedimientos experimentales que impliquen cultivos celulares primarios humanos y de ratón, líneas celulares establecidas y modelos celulares tridimensionales (3D), de acuerdo con la normativa vigente.

El servicio dispone de diferentes instalaciones especializadas para el cultivo celular convencional, así como para el desarrollo, automatización y análisis de modelos 3D derivados de células madre, incluyendo organoides, embrioides y otros modelos complejos in vitro.

 

El Servicio está compuesto por las siguientes infraestructuras:

 

a. Sala de Cultivos Celulares P2

La Sala de Cultivos Celulares P2 está destinada al trabajo con cultivos celulares primarios humanos y de ratón y líneas celulares establecidas. También permite realizar procedimientos de transfección y modificación genética mediante vectores virales, de acuerdo con las autorizaciones correspondientes y los procedimientos establecidos.

La sala está equipada con las instalaciones necesarias para la generación, mantenimiento y manipulación de cultivos celulares.

 

b. Sala Blanca para Cultivo 3D — Sala 129

La Sala Blanca (Sala 129) está específicamente destinada al desarrollo de modelos tridimensionales (3D) derivados de células madre humanas y de ratón, incluyendo cultivos de iPSC y hESC, para la generación de organoides, embrioides y otros modelos 3D complejos.

La sala proporciona condiciones ambientales controladas y está equipada para el cultivo y mantenimiento de modelos 3D derivados de células madre.

La Sala Blanca no está destinada al cultivo celular convencional en 2D, la reprogramación celular, la transgénesis ni la derivación de células madre. No está permitido el uso de células primarias, explantes derivados de modelos animales ni organoides generados a partir de cultivos primarios.

 

c. Plataforma Automatizada de Manipulación de Líquidos y Screening — Sala 136

La plataforma automatizada de manipulación de líquidos y cribado (Sala 136) admite la automatización de flujos de trabajo de cultivo celular, manipulación de muestras, adquisición de imágenes y análisis, con un enfoque particular en cultivo celular 3D y aplicaciones con organoides. La plataforma también está disponible para aplicaciones 2D y otras aplicaciones basadas en células donde se requieran flujos de trabajo automatizados de cultivo, imágenes, análisis o cribado. La plataforma está disponible para proyectos que involucren iPSCs humanas o de ratón y células madre embrionarias (ES).

La plataforma integra una incubadora de CO₂ Cytomat, un sistema automatizado de manipulación de líquidos Biomek i5 (Beckman Coulter) y un sistema de imágenes automatizado ImageXpress Nano (Molecular Devices).

Esta infraestructura permite flujos de trabajo automatizados y escalables utilizando placas de 96 y 384 pocillos, entre otras, que incluyen estudios de crecimiento y viabilidad de organoides, ensayos con líneas reporteras y cribado de fármacos.

 

d. Plataforma de Microscopía Automatizada — CellDiscoverer 7

El ZEISS CellDiscoverer 7 es un sistema de microscopía invertida totalmente automatizado para la adquisición y análisis de imágenes de células vivas. Permite controlar la temperatura, CO₂ y O₂, así como realizar adquisiciones automatizadas de imágenes durante periodos prolongados.

El sistema permite monitorizar y cuantificar diferentes procesos celulares, incluyendo fagocitosis, apoptosis, quimiotaxis, migración, invasión y citotoxicidad, así como realizar el seguimiento de células madre y evaluar la eficiencia de transfección y clonación.

 

 

 

2. Servicios ofrecidos

 

• Control de acceso y registro de usuarios autorizados.
• Formación de usuarios y asesoramiento técnico.
• Asesoramiento en el diseño y desarrollo de experimentos de cultivo celular y modelos 3D.
• Elaboración y actualización de los procedimientos de funcionamiento de las instalaciones y supervisión de su cumplimiento.
• Gestión de equipos, reservas y planificación del uso de las instalaciones.
• Mantenimiento preventivo, limpieza y seguimiento del estado de los equipos.
• Soporte técnico para protocolos de cultivo 3D, generación de organoides y análisis 3D.
• Soporte para automatización, análisis y screening mediante la plataforma Biomek–Cytomat–ImageXpress.

 

3. Contactos

 

Responsable científico: José Antonio Sánchez Alcázar

Responsable técnico (Sala P2, CellDiscoverer): Corín Díaz Ramos

Tel.: +34 954 977 432
E-mail: cdiaram@upo.es

Responsable técnico (Sala Blanca y Plataforma de Automatización): Jelena Raspopovic

Tel.: +34 954 349 197
E-mail: jras@upo.es

Asistencia general: Macarena Lopez Mayorga

Tel.: +34 954 977 432
E-mail: mlopmay@upo.es

 

 

4. Equipamiento

 

Sala P2

 

1. Dos Cabinas de bioseguridad de clase II:

Bio II advance 3 de Telstar, una de las cuales es exclusiva para el trabajo con virus.

 

2. Dos incubadoras de cultivo celular (CO2): 

 

 

Incubador de CO2 Nuaire NU58416

 

3. Instalación de CO2: 

El equipamiento de los incubadores se complementa con una instalación de CO2
que asegura el suministro constante de CO2 a los incubadores, realizando un cambio automático de las botellas.

 

4. Centrifuga de sobremesa multitarea – Allegra X-12 (BECKMAN COULTER):
Velocidad máxima 10.200 rpm. Capacidad máxima de 3.000 ml.

 

 

5. Contador automático de células:
Handheld automated cell counter (Millipore)

 

 

6. Un Autoclave de sobremesa y un baño

 

 

También tenemos:

 

7. Un microscopio invertido de luz transmitida con objetivos 10x, 20x y 40x, marca Leica

 

8. Una bomba de vacío

 

9. Un frigorífico/congelador

 

 

 

 

Plataforma de Microscopía Automatizada — CellDiscoverer 7

 

• ZEISS CellDiscoverer 7
• Objetivos 5×, 20× y 50×
• Microscopía de campo claro y fluorescencia
• Control ambiental de temperatura, CO₂ y O₂
• Adquisición automatizada multidimensional de imágenes
• Software ZEN para adquisición, procesamiento y análisis de imágenes

 

 

Sala Blanca (Sala 129)

• Pre-sala de vestimenta limpia para cambio de EPI y acceso controlado a la sala blanca.
• 2 cabinas de flujo laminar Telstar BIOptima

 

• 2 Incubadoras de CO₂ Thermo Fisher, una equipada con agitador orbital

• Incubadora Eppendorf CellXpert C170i CO₂/hypoxia

• Equipo de litografía para crear patrones en plásticos y producir placas y soportes específicos para células: Jelight UVO Cleaner 30 (usado solo con supervisión)

 

 

• Un baño seco VWR, dos microscopios invertidos, un ZOE Cell Imager, un refrigerador y un congelador

 

Plataforma automatizada de manipulación de líquidos y cribado, Sala 136

• Incubadora de CO₂ Cytomat — incubación y almacenamiento de microplacas.
  • Biomek i5 (Beckman Coulter) — manipulación automatizada de líquidos y ejecución de protocolos programables.
  • ImageXpress Nano (Molecular Devices) — adquisición y análisis automatizados de imágenes. Equipado con objetivos de 4×, 10×, 20× y 40×, imágenes de luz transmitida y canales fluorescentes FITC, Cy3, Cy5 y DAPI. Control ambiental de CO₂/hipoxia y humedad. Software MetaXpress para la adquisición y el análisis de imágenes.